苹果皱果类病毒病是怎样检验与检疫的

指示植物：

品种Ohrin：果严重皱缩，果肉中散生褐色坏死块，树干和枝条无症状。

品种Jonathan：果皱缩和斑纹，树干和枝条无症状。

品种StarkingDelicious：树皮出现疱疹，果无症。

品种NY58-22：果严重皱缩，有斑纹，果肉中散生褐色坏死块，树干和枝条的皮出现疱疹。

分子生物学检测：

RT-PCR检测：YOSHIDAandITO（2002）用RT-PCR检测。根据AFCVd的碱基序列设计的引子对，从苹果病树的叶柄或树皮，抽提总RNA。进行RT-PCR扩增。扩增产物电泳，表明为一专化节分，可用于检测小样，需2d时间。

生物素标记cDNA探针，进行印迹杂交（nothernblothybridization）（Itoetal.，1993）。

检疫危险性评价：本病的病原苹果皱果类病毒，可由苹果无性繁殖材料远距离传播。介体不知。对苹果生产可构成严重经济损失。季良进行危险性评价时危险度值8分，为中危检疫性有害生物。国内尚未发生，已列入中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录（2007年）。

地理分布：日本。

检疫国家地区：中国。

应检植物：苹果无性繁殖材料。

检疫措施：进口时须经国家质量监督检验检疫总局特许审批，限量进口，并要求附有出口国《检疫证书》，保证不带有此类病毒。入境后须经指定的隔离检疫站进行一年以上生育期检验，确认无病者，交还进口货主，并在隔离条件下繁殖无病毒种苗，才允许用于生产种植。

苹果病毒病害是什么

苹果病毒病是影响我国苹果生产的突出问题。据调查，全国各地已有大量果树感染病毒病。渤海湾、黄河故道和西北高原3大苹果主产区，果树带毒株率已高达60%～80%，一般减产30%～45%。一些主栽品种已普遍潜带，成为苹果生产的一大隐患。

经科学鉴定，现已明确主要产区病毒有：苹果花叶病毒、苹果锈果类病毒、苹果绿皱果病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒和苹果褪绿叶斑病毒6种。前3种症状明显，容易识别，称非潜隐性病毒；后3种不表现症状，病毒呈潜隐状态，病树不死亡，对生长结果无明显影响，但树势衰弱，生长不齐，果实成熟晚，个头小，品质劣，产量降低。

症状

苹果花叶病有5种表现：①花叶型。叶片出现深绿、浅绿相间的病斑，边缘不清晰；②斑驳型。叶出现大小不等、不定形鲜黄色病斑，边缘清晰；③条纹网纹型。叶脉失绿部分较宽，成网纹状。幼叶顶部以支脉为界，形成“V”字形黄斑；④环斑型。叶上出现鲜黄色、圆或椭圆形斑纹，环或近环状；⑤镶边型。病叶边缘黄化，形成变色锯齿状镶边。这5种类型常混合出现。病树新梢变短，节数减少，产量降低。

苹果锈果病症状有3种：①锈果型。出现5条深绿色水渍状病斑，与心室相对，断续，后呈茶褐色，木栓化；②花脸型。成熟果红绿相间，着色部位突出，果面凹凸不平，呈“花脸”状；③复合型。果上有黄绿色斑块，边缘不整齐，既有锈斑，又有花脸型。病果肉甜，发艮，鸡卵大小，丧失经济价值。

潜隐性病毒症状不明显，常与栽培原因混淆。病树一般叶小而硬，发黄，早落，花芽多，果肉质硬，部分果实变长。红星、金冠果实有条纹，根坏死，木质部表面有凹陷斑等。

病原

花叶病毒（AMV），称李属坏死环斑病毒。病毒粒体球形，直径25～29纳米。苹果锈果病毒有ASSD-RNA-1和ASSEHRNA-2两种，病毒粒体环状，存于病枝中。苹果绿皱果病毒（AGCV）粒体目前尚不清楚。苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎痘病毒（ASPV）、茎果茎沟病毒（ASGV）粒体曲线条状，单独或复合侵染，潜隐于树体中。

发病特点

①只通过嫁接传毒。目前尚未发现传毒昆虫和根部接触传染；②工具传毒。凡在病株用过的刀锯剪等均可传染；③整株带毒，终生受害；④接穗传毒。种子、实生苗无毒。目前我国现栽的大多数品，种和矮化砧木带毒。当砧木抗病时，嫁接后一般不表现症状，慢性为害；当砧木或接穗某一方不耐病时，嫁接后病毒由潜伏状态变为急性为害，病树迅速衰弱至死亡；⑤苹果与梨树混栽或相邻的果园，苹果锈果病发病较重。

防治方法

（1）严格检疫。检疫部门应确定疫区，严禁从疫区调出繁殖材料，7月下旬对产地进行检疫检查，及时伐除病株、病苗。

（2）果园发现病株坚决刨除。对花叶病和锈果病株，应在生长季节树干涂上标记，秋后刨除。工具严格酒精浸泡消毒，不在健株用。

（3）药剂治疗。对花叶病株可喷20%盐酸吗啉胍·铜（防病毒A）4000倍液，每7天1次，连喷2～3次。对锈果病株，可涂刷四环素50万单位，或农用（鲁用）链霉素150万单位液。做法是先用利刀在树干皮部切成“∩”形缝，然后刷药入缝，包扎塑料膜，待药液润吸干以后，及时拆膜。

（4）建立无病毒苗木繁育基地。可向科研部门购进脱毒苗木，于当地远离梨树100米以外处，建立繁育基地，设母本园、采穗圃、示范园、繁育圃，繁殖无毒苗推广应用。脱毒苗生长势旺，苗木整齐，结果早，增产潜力大。但应栽壮苗，防止旺长抽条，及时防治真菌病害。

苹果茎沟病毒病是怎样检验与检疫的

鉴别寄主：

（1）木本指示植物。

弗吉尼亚小苹果是苹果茎沟病毒常用的木本指示植物，在苹果健康实生苗上通过二重芽接法进行病毒鉴定。在田间，病株较健株生长矮小并衰弱，叶片色淡。有的病株嫁接口周围肿大，形成1个“小脚”，接合部内有深褐色坏死环纹。木质部表面产生深褐色凹裂沟，严重时从外部即可辨认。病株遇强风往往从嫁接口处折断。在温室，苹果茎沟病毒在弗吉尼小苹果叶片上产生黄斑或黄色环纹。黄斑常分布在叶片一侧，且多数在叶边缘。有病斑的一侧叶片变小，形成舟形叶，这一症状与苹果褪绿叶斑病毒在苏俄苹果上的表现相似。病叶多在黄斑处发生皱缩，病株木质部表面产生褐色凹陷条沟。

（2）草本指示植物

①昆诺藜。有的分离物使接种叶产生直径为0.5～2mm的坏死斑，通常系统症状为褪绿斑，叶片基部病斑比顶端多。病株生长矮化，顶部叶片扭曲畸形。有的分离物引起叶柄下垂，未接种的老叶出现异常的深绿色。初始病斑的出现比苹果褪绿叶斑病毒迟2～3d。这两种病毒同时感染比单独一种病毒感染所产生的系统症状更为严重。

②苋色藜。接种叶片基部产生直径为1.5mm左右的浅黄色坏死斑，新叶表现系统褪绿斑。

③藜。接种叶片产生褪绿斑驳，病叶常大面积失绿，新叶表现系统褪绿斑症状，常扭曲畸形，病株顶端枯死。

④心叶烟。主要在嫩叶上表现系统黄色叶和线纹斑症状，偶尔出现坏死。

⑤菜豆。在叶片上产生直径0.5～3mm的紫褐色坏死斑或环，有时产生褪绿斑。多数品种出现系统的叶脉坏死症状。

枯斑寄主：昆诺藜和菜豆Pinto品种可否用作枯斑寄主取决于病毒分离物。有些分离物在昆诺藜上不产生枯斑（deSequeira，1965，1967）。

体外稳定性：

①钝化温度。60和63℃（Lister，1970）。

②稀释终点。10-4（Lister，1970）。

③体外存活期。20℃下2d，4℃下27d以上。

血清学检测：与柑橘碎叶病毒（Citrustatterleafvirus）在血清学上相关。在免疫扩散试验和免疫电镜观察中，柑橘碎叶病毒与苹果茎沟病毒的抗血清有阳性反应（Nishio，etal.，1989）。应用ELISA法可检测到苹果叶片和花瓣中的苹果茎沟病毒（Fucks，1980）。用F（ab′）2片段改进的ELISA法对同源株系较直接ELISA法灵敏（Yanaseetal.，1986）（洪霓等1992）。

电镜观察：病毒粒子呈纤维状，极弯曲（Lister，1970；deSequeiraandLister，1969）。在叶肉细胞及韧皮部薄壁细胞的细胞质中有病毒粒子，但不发生在筛管的细胞质中（Ohkietal.，1989）。

检疫危险性评价：本病的病原体苹果茎沟病毒，可通过苹果的繁殖材料进行远距离传播。苹果茎沟病单独发生时，病树生长量减少10%～15%，产量降低5%～10%；当与苹果褪绿叶斑病毒混合侵染时，病树生长量减少20%～30%，产量下降10%～15%，给苹果生产造成严重损失。季良进行危险性评价时，危险度8分，为中危有害生物。国内虽已有发生，但鉴于其对果树农业生产的危害性，应列入国内防治重点和内检对象。

地理分布：苹果茎沟病毒在世界各国发生均很普遍，在苹果栽培品种和矮化砧木上的分布极为广泛。据新西兰调查，被检测的24个苹果品种中，有19个带有苹果茎沟病毒；苹果根砧中，M12，M16和君袖等，都带有苹果茎沟病毒。

检疫国家地区：中国、阿根廷、秘鲁、印度尼西亚、智利、澳大利亚、印度尼西亚、英国、法国、意大利、阿尔及利亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克。

应检植物：苹果的繁殖材料。

苹果坏死病毒病是怎样检验与检疫的

枯斑寄主：苋色藜。

体外稳定性：无报道。

电镜观察：电镜下观察到沿细胞质膜排列的病毒粒子。

检疫危险性评价：本病的病原苹果坏死病毒，可通过苹果的繁殖材料进行远距离传播。病树产生系统性坏死叶斑，可给生产一定造成损失。国内尚无发生。季良进行危险性评价时，危险度8分，为中危检疫性有害生物。

地理分布：日本。

检疫国家地区：澳大利亚、印度尼西亚、秘鲁、英国、法国、意大利、阿尔及利亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克。

应检植物：苹果的繁殖材料。

检疫措施：进口时要求附有出口国《检疫证书》，保证不带此类病毒。入境后须在当地植物检疫机构监督下，确认无病者，才允许用于繁殖或生产种植。

苹果主要病毒病害有哪些

迄今危害苹果的已知病毒病害有20余种.我国已确认的,而且在生产中危害性较重的有5种.

（1）苹果花叶病（Applemosaic）：叶片上出现淡黄色斑点,叶斑无特定大小和形态,有时沿大叶脉形成带状斑,严重时,叶片局部或全部褪绿；能造成树体长势衰退、产量降低、单果重下降等慢性危害.

（2）苹果锈果病（AppleRoughSkin）：病果症状表现为锈果型、花脸型和混合型3种类型.①锈果型.谢花后1个月左右,果实顶部出现颜色稍浓的水渍状变色部分,渐扩大成为规格整齐的5条纵纹,恰与心室顶部相对.此后,水渍状斑纹木栓化,呈铁锈色.发病品种有国光、富士、印度等.②花脸型.病果着色后,果面散生圆形、黄绿色斑块,果实成熟后,成为红绿相间的花脸果.发病品种有祝光等.③锈果花脸混合型.着色前多在果顶部出现或在果面散生零星锈斑,着色后在未生锈斑部分出现不着色斑块.发病品种有元帅、新红星等.

（3）苹果绿皱果病（AppleGreenCrinke）：感病树谢花后20天左右,果面出现水渍状凹陷斑块,继而果面凹凸不平,成为畸形.7月下旬以后果皮木栓化,铁锈色,无裂纹.病果内部的凹陷斑下,维管束呈绿色,弯曲变形.有的无明显凹陷斑,但产生木栓化小丘状突起或条沟.有的果形正常,但着色前果面发生浓绿色斑痕,斑痕处也木栓化.

（4）苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）：潜隐病毒.感病树枝干木质部表现出凹陷斑沟,叶片向背面弯曲,植株衰退.

（5）苹果茎沟病毒（ASGV）：潜隐病毒.感病树叶片变黄,嫁接口坏死,树势衰退.以上ACLSV、ASPV和ASGV单独或复合侵染,能引起苹果衰退病（高接病）的发生,致树体衰退乃至死亡.